mtt测定细胞活力（MTT检测细胞代谢活力的方法及应用）
MTT检测是一种经典的检测细胞代谢活力的方法，可以用来评估细胞的活性、增殖、毒性等。本文将介绍MTT检测的原理、步骤和应用。
1. MTT检测原理
MTT是一种黄色的化合物，它可以渗透进细胞内，在活细胞中被代谢成紫色的甲醛溶液。这个代谢过程是有胞浆内的过氧化物酶系统参与的。因此，MTT检测可以反映细胞内代谢活力的变化。
MTT试剂适用于多数哺乳动物细胞，但通常只限于在培养基中生长的细胞。有些不适合MTT检测的细胞，例如人类血小板、脂肪细胞、红血球等。
2. MTT检测步骤
MTT检测步骤主要包括以下几个环节：
(1) 细胞处理。将生长在平板上的细胞转移到96孔板中，达到的数量大约为每孔1×10^4个。如果需要检测细胞增殖，则应在细胞繁殖期进行检测；如果需要检测细胞毒性，则在细胞达到稳定期后进行检测。一般情况下，细胞处理时间也要符合实验设计的需求。
(2) MTT试剂处理。在细胞处理后，将每孔200μl含有MTT的培养基加入96孔板中。将板被覆盖，孵育达到预设时间。
(3) 细胞裂解。在培养基中加入数滴裂解液(如DMSO)，使细胞内产生的紫色染料在裂解液这一有机盐溶液中溶解。裂解时间在阴暗中进行，经震荡后产生的溶液可用于检测。
3. MTT检测应用
MTT检测被广泛应用于生命科学领域中的实验室研究，如体外研究细胞各种生物学特性的变化、筛选化合物的细胞毒性等。此外，MTT检测在肿瘤药物活性筛选、药效学研究、细胞增殖及凋亡等领域也有非常重要的作用和应用前景。
MTT检测方法的优点是多样化，定量性好，操作简单，时间和成本都比较低。但也存在着一些局限性：比如只有在细胞代谢能力良好的情况下可用，而且细胞数量过多则会产生误差，而少于5×10^3个细胞时，试验效果又不稳定。因此，在MTT检测应用之前我们需要详细考虑其局限性。
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